上海紀寧生物有限公司是一家科研和銷(xiāo)售科學(xué)試劑產(chǎn)品，領(lǐng)域涵蓋化學(xué)、分析化學(xué)、生命科學(xué)和材料科學(xué)等基礎創(chuàng )新領(lǐng)域，助力客戶(hù)的研究計劃。紀寧生物帶您詳細了解細胞冷凍保存的實(shí)驗原理介紹如下：

1、材料：
生長(cháng)良好之培養細胞、新鮮培養基、DMSO(Sigma D-2650)、無(wú)菌塑料冷凍保存管(Nalgene 5000-0020)、0.4％（w/v）trypan blue(GibcoBRL15250-061)、血球計數盤(pán)與蓋玻片、等速降溫機(KRYO10SeriesII)
2、冷凍保存方法
（1）傳統方法: 冷存管置于4℃10分鐘--->-20℃30分鐘--->-80℃16～18小時(shí)(或隔夜)--->液氮槽vaporphase長(cháng)期儲存。
-20℃不可超過(guò)1小時(shí)，以防止胞內冰晶過(guò)大，造成細胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
（2）程序降溫：利用已設定程序的等速降溫機以-1～-3℃/分鐘之速度由室溫降至（-80℃以下）-120℃，再放在液氮槽vaporphase長(cháng)期儲存。適用于懸浮型細胞與hybridoma之保存。
3、步驟
（1）冷凍前24-48小時(shí)更換半量或全量培養基，使細胞處于指數生長(cháng)期。
（2）配制冷凍保存溶液(使用前配制)：另取一離心管，加入培養基、血清，逐滴加入二甲基亞砜（DMSO）至20%濃度，即制成雙倍的凍存液，置于室溫下待用。
（3）離心收集培養之細胞，用加血清的培養基重懸起細胞，取少量細胞懸浮液(約0.1ml)計數細胞濃度及凍前存活率。
（4）取與細胞懸液等量的凍存液，緩慢逐滴加入細胞懸液，并晃動(dòng)試管，制成細胞凍存懸液（DMSO＊后濃度為5～10％），使細胞濃度為1～5×106cells/ml，混合均勻，分裝于已標示完全之冷凍保存管中，1～2ml/vial，并取少量細胞懸浮液作污染檢測。嚴密封口后，注明細胞名稱(chēng)、代數、日期。然后進(jìn)行凍存。
上海紀寧生物公司產(chǎn)品有ELISA試劑盒、細胞培養、各類(lèi)生化試劑、生化檢測試劑盒、金標檢測試劑盒、食品檢測試劑盒、分子生物學(xué)試劑盒、培養基、胎牛血清、科研抗體、生物耗材等。