紀寧生物亮氨酸氨基肽酶(LAP)測試盒(分光光度法/48樣)樣本的前處理：

注意：正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

LAP是一類(lèi)能水解肽鏈N-末端為亮氨酸的酶，廣泛存在于肝、腎、胰等組織中，尤其以肝臟中含量最為豐

富。各類(lèi)肝病患者因肝細胞損傷，血清LAP的活性均有不同程度的升高，因此，血清LAP活性的檢測能

從不同側面反映各種肝病的發(fā)生和發(fā)展。

測定原理：

LAP分解L-亮氨酰對硝基苯胺生成對硝基苯胺，后者在405nm有最大吸收峰，通過(guò)測定吸光值升高速率來(lái)

計算LAP活性。

自備用品：

可見(jiàn)分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體40mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；

樣本的前處理：

1、細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個(gè)）：提

取液體積（mL）為1000~5000：1的比例（建議2000萬(wàn)細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或

細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g4℃離心10min，取上清，置冰

上待測。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL提

取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

LAP測定步驟：

1、分光光度計預熱30min以上，調節波長(cháng)至405nm，蒸餾水調零。

2、將試劑二轉移至試劑一中充分溶解（如較難溶解，可50℃水浴加熱約30min促進(jìn)溶解）；在37℃（哺

乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴10min以上；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

3、在微量石英比色皿或96孔板中加入250μL樣本和750μL試劑一，混勻后立即記錄405nm處初始吸光

值A1和2min后的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。

注意事項：若ΔA大于0.5，需將酶液用提取液稀釋?zhuān)嬎愎街谐艘韵鄳♂尡稊?。使A2-A1小于0.5，

可提高檢測靈敏度。

LAP活力單位的計算：

1、血清（漿）LAP活力的計算:

單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘生成1nmol的對硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10?

]÷V樣÷T=205.8×ΔA

2、組織、細菌或細胞中LAP活力的計算:

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1nmol對硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP（nmol/min/mgprot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10?

]÷(V樣×Cpr)÷T=205.8×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織每分鐘生成1nmol對硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP（nmol/min/g鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10?

]÷(W×V樣÷V樣總)÷T=205.8×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細菌或細胞每分鐘生成1nmol對硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP（nmol/min/10?cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10?

]÷(2000×V樣÷V樣總)÷T=0.103×ΔA

V反總：反應體系總體積，1×10-3L；ε：對硝基苯胺摩爾消光系數，9.72×103L/mol/cm；d：比色皿光徑，

1cm；V樣：加入樣本體積，0.25mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應時(shí)間，2min；Cpr：樣本

蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；2000：細菌或細胞總數，2000萬(wàn)。

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